IVT RNA合成
体外转录（IVT）是一种实验室常用的技术，主要是利用含有T7启动子，T3或SP6启动子序列的DNA为模板，分别在含有T7、T3或SP6 RNA聚合酶的条件下，以NTP或者修饰碱基为底物合成与模板DNA中一条链互补的RNA，可以在无细胞环境中大量生成RNA分子。IVT RNA在RNA疫苗，基因编辑，多能干细胞的生成以及基于RNA扩增的诊断技术的开发方面发挥了重要作用。
Azenta安升达基于丰富的核酸合成经验以及先进的RNA质控设备，拥有完善的RNA生产平台，为医药企业、基因治疗公司和科研机构 提供RNA合成服务。生产规模从μg到mg级别，产品交付周期短、质控严格，能满足医药公司临床前研究和科研机构基础研究等需求， 帮助加速科研进程。
服务优势
多种规格——提供从μg到mg级别的IVT RNA合成服务
多种选择——提供现货和定制化服务，满足客户不同科研需求
服务流程
定制化服务
安升达可提供IVT mRNA、circRNA、sgRNA和dsRNA的合成服务，满足客户不同研究领域的应用需求。
mRNA的修饰包括：加帽、加尾、核苷酸修饰（Ψ或N1-Me-Pseudo UTP）。
| 产品类型 | 长度 |
规格 |
修饰 |
| mRNA | 81-6000 nt | 100 μg-10mg |
加帽、加尾、核苷酸修饰（Ψ，N1-Me-Pseudo UTP或5mC） |
| ＞10mg（咨询） | |||
| ＞6000 nt | 咨询 | ||
| circRNA | 81-3000 nt | 20 μg-1mg | 无修饰 |
| ＞3000nt | 咨询 | ||
| sgRNA | ＜150nt | 订购量可定制 | – |
| dsRNA | ＜8000 nt | – | |
| siRNA* | 20~25nt | 提供多种核苷酸修饰定制 |
*：siRNA为化学合成
现货产品
| 名称 | 修饰类型 | 规格 |
| copGFP |
帽子结构：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR |
100 μg/tube
浓度：1 μg/uL 可选干粉发货 |
| Luciferase | 帽子结构：Cap1
UTR：5’UTR+3’UTR |
100 μg/tube
浓度：1 μg/uL 可选干粉发货 |
| mCherry | 帽子结构：Cap1
UTR：5’UTR+3’UTR |
100 μg/tube
浓度：1 μg/uL 可选干粉发货 |
| Cas9 | 帽子结构：Cap1
修饰碱基：无修饰/N1-Me-Pseudo UTP |
100 μg/tube
浓度：1 μg/uL 可选干粉发货 |
|
copGFP-circRNA /Luciferase-circRNA /mCherry-circRNA /Cas9-circRNA |
/ | 10 μg/tube
浓度：1 μg/uL 可选干粉发货 |
QC检测
| 检测项目 | 检测方法 | ||
| 标准 | Linear RNA | DNA模板测序 |
Sanger测序 |
| 浓度 | nanodrop定量 | ||
| 纯度/完整度 | A260/280 | ||
|
琼脂糖凝胶电泳 |
|||
| circRNA | 纯度 |
RNaseR消化 |
|
| 接口测序 |
Sanger测序 |
||
| 定制化* | Linear RNA | RNA长度及完整性 | 毛细管电泳（2100，2200等） |
|
加帽效率检测 |
LC-MS | ||
| polyA长度检测 | 酶切和CE | ||
|
RNA-SEQ |
NGS测序 | ||
| 蛋白质残留 | Nano Orange 分析 | ||
|
DNA残留 |
qPCR |
||
| dsRNA含量 | ELISA | ||
| 内毒素（定量） | 定量 | ||
| 内毒素（半定量） |
半定量 |
||
| 生物负载 | 生物负载实验 | ||
| circRNA | 纯度 | 毛细管电泳检测 | |
| circRNA全长鉴定 | 反转录后PCR扩增，Sanger测序 | ||
注：* 定制化的QC均需要支付额外的费用。
案例1 不同长度mRNA合成
1:113 nt RNA; 2:164 nt RNA; 3:303 nt RNA; 4:1336 nt RNA; 5:1926 nt RNA; 6: 3204 nt RNA; 7: 4001 nt RNA; 8: 7192 nt RNA; 9:5292 nt RNA;
案例2 IVT合成cap1和Ψ修饰的mRNA
加帽加尾以及Ψ修饰，可提高IVT mRNA的稳定性并且增强其翻译能力，降低mRNA的免疫原性。
N1-Me-Pseudo UTP修饰的mRNA，转染到HEK293T细胞中，可以高效的表达coGFP.荧光蛋白
案例3 circRNA合成
结果显示，安升达升级优化生产工艺后合成的环状RNA，接口处序列正确，纯度高，
无Linear RNA等其他杂质，稳定性高，细胞转染7天后仍稳定表达。
